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改善液相色谱基线噪音的方法(上)

发布日期:2019-03-04 16:53    来源:未知
基线噪音是做液相的同学经常感到头疼的问题,尤其是在做痕量分析的时候。今天,我们来分析下噪音的来源,以及如何减小和消除噪音。
 
一.流动相的在线混合
流动相在线混合是为了简化实验步骤,流动相混合的不充分是基线噪音的一个重要来源。
流动相混合方式主要两种:
1.低压混合:采取时间脉冲的方式,利用比例阀,将不同流动相按一定比例混合。
2.高压混合:利用多个泵头,控制每个泵的流量,来将流动相按一定比例混合。
    从流动相开始混合在一起,到流动相到达色谱柱头,这一段体积叫做延迟体积(Delay Volume)。混合器体积越大,混合越好,但是相应延迟体积就越大,会造成梯度的延迟。换句话说,就是流动相的变化,需要一定时间后,才能真正到达色谱柱,对分离产生影响。这个现象在使用UPLC或者UHPLC的时候,会有比较明显的作用。
 
那如何减小因为混合而造成的基线噪音呢?
1.对于等度的方法:非常简单,预混流动相就可以了。
2.对于梯度的方法:部分预混流动相也会帮助更好的混合,怎么做呢?看下面的例子。
  方法要求乙腈/水比例从10%走到85%。那可以将流动相A配成10%的乙腈,流动相B配成85%的乙腈,然后A/B梯度从0%走到100%。这就是部分预混。
3.增大混合器的体积:一般混合器的体积从几百ul到几ml都有,在允许的延迟时间下,更换一个体积更大的混合器,能够有效提高混合的效率。
 
二.液相硬件问题造成的基线噪音
如果液相系统某些地方的工作不正常,也可能造成基线的噪音。
1.系统有漏:特别是肉眼无法发现的微漏或者泵的内漏,会造成流速的变化和混合比例的变化,从而导致基线噪音。
  检查的方法就是对系统进行压力测试:将系统从某个地方用死堵堵上,如泵出口,或者自动进样器出口,将压力升高到350bar后停泵,监测压力下降的情况。一般的标准是2-3bar/min的下降是正常水平。或者15%/10min的下降。
2.梯度比例问题:可以对系统进行一个梯度测试,来检查梯度混合是否准确和一致。
梯度测试
a.将A配成0.1%的丙酮,B是水。
b.在265nm的波长下,将A的比例从10%,20%,30%这样一个一个的升高,每个比例走3min。
c.可以根据计算,看每个基线台阶上升是否准确。
d.也可以从0-100%走一个连续的梯度,看基线上升的平滑性和线性。
 
三.流动相脱气不好造成的基线噪音
    对流动相进行脱气,不仅仅是为了防止系统里面气泡的产生。流动相脱气越好,基线就会越好。
    如今最常用的脱气方式是在线脱气机,但是有的时候脱气并不彻底。所以当有基线噪音问题时,可以考虑采取多种脱气方式。
  
    前面三点讲的都是内在原因造成的基线噪音或者波动。如果你前面的原因都找过了,问题还没有解决,就得考虑一下是不是流动相里面有杂质或是电路噪音,我们下一节继续讲解。
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